4-Nitrophenyl beta-D-galactopyranoside CAS:200422-18-0

Tác dụng: ONPG là một chất nền được sử dụng đặc biệt để phát hiện sự hiện diện và hoạt động của enzyme β-galactosidase. Khi enzyme β-galactosidase có mặt và hoạt động, nó sẽ phân giải ONPG thành hai sản phẩm: o-nitrophenol và một dẫn xuất của galactose. Sự giải phóng o-nitrophenol dẫn đến sự thay đổi màu vàng, có thể được đo bằng máy quang phổ.

Ứng dụng: ONPG có nhiều ứng dụng trong nghiên cứu sinh học phân tử và sinh hóa:

Xác định hoạt tính β-galactosidase: ONPG thường được sử dụng để đo và định lượng hoạt tính của enzyme β-galactosidase. Tốc độ hình thành o-nitrophenol, tỷ lệ thuận với hoạt tính enzyme, có thể được đo bằng phương pháp quang phổ.

Biểu hiện và điều hòa gen: ONPG thường được sử dụng trong các thí nghiệm liên quan đến nghiên cứu biểu hiện và điều hòa gen. Nó thường được dùng trong các xét nghiệm protein lai, chẳng hạn như hệ thống lai lacZ thường được sử dụng, để nghiên cứu sự biểu hiện của gen dưới sự kiểm soát của các promoter cụ thể. Hoạt tính beta-galactosidase đo được bằng ONPG cung cấp thông tin chi tiết về mức độ biểu hiện gen.

Sàng lọc hoạt tính β-galactosidase: ONPG có thể được sử dụng như một phương pháp sàng lọc màu trong công nghệ ADN tái tổ hợp để xác định sự hiện diện và chức năng của gen LacZ, mã hóa β-galactosidase. Phương pháp sàng lọc này giúp xác định các dòng tế bào chứa gen cần nghiên cứu.

Nghiên cứu động học enzyme: ONPG cũng hữu ích trong việc nghiên cứu động học của enzyme β-galactosidase. Bằng cách đo tốc độ phản ứng giữa enzyme và chất nền ở các nồng độ chất nền khác nhau, có thể xác định các thông số động học như hằng số Michaelis-Menten (Km) và tốc độ phản ứng tối đa (Vmax).